单线态氧荧光探针 Singlet Oxygen Sensor Green（SOSG）

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产品关键词：

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG；单线态氧（Singlet Oxygen,1O2）；单线态氧荧光探针；S36002；Thermo Fisher; ROS（Reactive oxygen species）活性氧物质；

活性氧引起的许多生理损伤都可能归因于单线态氧（1O2），包括与脱氧鸟苷选择性反应形成8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的核酸修饰。单线态氧的寿命足够长（水中有4.4μs）使其能够充分扩散进入细胞和组织。实验室中通常用三种之一的方法来生成单线态氧：1）使用感光染料对二氧（3O2）进行光化学反应来制备；2）通过对一种过氧化物或二氧环丁烷进行加热分解制备；3）氧气流内通过微波放电来制备；单线态氧通过在1270nm处具弱化学发光的典型特征直接被检测。

Thermo fisher（molecular probe）公司开发的Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG是目前商业化可得且应用最广泛的单线态氧荧光探针，从材料学到药物学领域，比如光动力学疗法。

【特异性强】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG高度选择性结合单线态氧（1O2）。不像其他的荧光和化学发光的单线态氧检测试剂，SOSG与其他活性氧物质（ROS），包括羟基自由基（·OH）、超氧阴离子（·O2–）和一氧化氮（NO）无可见反应【见图1】。

图1、Singlet Oxygen Sensor Green (SOSG)的荧光反应和对单线态氧（1O2）的特异性。A）用荧光光度计（Ex/Em= 488/525nm）测定溶液内的荧光，溶液内含SOSG（1 μM ）和亚甲基蓝（10 μM）溶于100mM pH 7.5 Tris Buffer; 单线态氧清除剂叠氮钠（NaN3，1 mM）；或50% D2O（重水，能够延长1O2的寿命）。每20s完成一次荧光测定，每次测定间隔30s（如灰条标示）。在这30s的间隔中，样本暴露于激光辐射（630–680 nm，<5 mW），导致亚甲基蓝光敏生成1O2。B）用荧光光度计（Ex/Em=488/525nm）测定溶液内的荧光，溶液为50mM pH 7 Tris buffer，1mM 黄嘌呤，SOSG（1 μM ），或含SOSG（1 μM ），或含二氢罗丹明123。约20s之后，加入50 mU/mL黄嘌呤氧化酶（XO）。XO催化黄嘌呤的氧化，产生尿酸和超氧化物。超氧化物瞬间被H2O2降解。

【荧光特征】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG与单线态氧（1O2）反应前，探针最初发弱蓝色荧光，激发峰在372nm和393nm，发射峰在395nm和416nm。当含单线态氧（1O2），探针发射绿色荧光，光谱特征类似于荧光素（最大激发/发射波长约504/525nm）。

【线性化关系】

研究发现Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG的荧光产物在某些溶液中随着时间被降解，且在不含单线态氧的碱性pH溶液中，Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG会发荧光。不过，当进行适当的操作，绿色荧光信号的强度与单线态氧（1O2）含量相关，且不会受其他ROS的明显干扰。

【应用】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG证实能用来检测溶液和植物组织中的单线态氧（1O2）。

【使用方法】

1.       SOSG储存液制备：收到货按照≤-20℃避光干燥保存。用甲醇来制备储存液，每100μg粉末加入33μl甲醇制备~5mM储存液。正式实验前制备工作液，不能用完的工作液需丢弃，不可保存后再用。

2.       溶液检测：SOSG不具细胞膜渗透性，设计用来检测溶液环境内的单线态氧。最佳的稀释缓冲液和工作浓度需根据经验来调整。建议起始工作浓度为1-10μM。

【争议点】

Singlet Oxygen Sensor Green®, SOSG不具有细胞膜渗透性，能用于细胞单线态氧（1O2）检测？

专利持有方thermo（molecular probe）官方说明此探针不具有细胞膜渗透性，适用于溶液体系单线态氧（1O2）检测。然而，Gollmer A et al.报道SOSG能插入活哺乳动物细胞（文献来源：Gollmer A et al. Singlet Oxygen Sensor Green®: photochemical behavior in solution and in a mammalian cell. Photochem Photobiol. 2011 May-Jun;87(3):671-9.）。

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【温馨提示】：见我司懋康生物整理的活性氧检测探针专题（Probes for reactive oxygen species）。

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注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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